疗效。
1、CRC中的MAF高度激活
?在LM中观察到aSMA、p-MLC2和COL-I的显着更高表达,表明MAF的肌成纤维细胞和ECM重塑特征。
?接下来,从CRC患者的pTU(CAF)和LM(MAF)中分离出原代成纤维细胞。MAF显示出aSMA和p-MLC2的显着上调,证实了肌成纤维细胞和细胞收缩性信号的增加。FAs的量化显示MAFs中FAs的平均面积更大(图L和M),支持CRCMAFs被高度激活。
2、晚期CRC患者的ECM重构和硬化特征
?为了鉴定与肝转移相关的基因表达特征,我们对CRC患者的pTU和LM进行了RNA测序(RNA-seq)。使用通路相互作用数据库(PID)对LM中上调基因进行的基因集分析(GSA)揭示了整合素信号传导的显着富集。为了进一步表征成纤维细胞的基因表达,我们在成功富集后对分离的原代CAF和MAF进行了RNA-seq。
?我们鉴定了3,721个差异表达的基因。GO确定了MAF中上调的肌成纤维细胞/ECM重塑特征。KEGG确定了ECM-受体相互作用和FA特征和PID确定了整合素信号(图H)。此外,基因集富集分析(GSEA)还揭示了差异表达基因的肌动蛋白介导的细胞收缩、FA、ECM成分、肌生成和血管生成特征的强烈富集(图I-M)。
3、MAFs增加微环境硬度,支持血管生成
?我们进行了凝胶重塑分析,并观察到MAF显示出更密集、更复杂的F-肌动蛋白网络(图A),并且可以比CAF更大程度地收缩凝胶(图B)。在新鲜和冷冻保存的组织中,我们观察到LM的基质硬度显着增加(图C-D)。基质硬度与来自同一患者的样本中的COL-I、aSMA和p-MLC2表达相关(图E-G)。
?基质硬化调节EC增殖、血管生成、血管生长和分支,为了研究这种联系,我们评估了LM中的脉管系统,并观察了基质硬度和CD31血管面积之间的相关性(图H)。当在凝胶内培养时,允许成纤维细胞重塑基质,MAFs诱导EC发芽的程度显着高于CAFs(图I-K)。因此,MAF支持伴随局部ECM重塑的细胞因子产生血管生成。
4、肾素-血管紧张素系统抑制目标成纤维细胞
?对新鲜分离的MAF与肝源性成纤维细胞的qPCR分析显示RAS系统的所有关键成分(血管紧张素原[AGT]、肾素[REN]、血管紧张素转化酶[ACE]和AT-1[AGTR1]的表达显着增加)。此外,MAFs表达的AGT和AGTR1水平显
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