肿瘤浸润B细胞(TIL-Bs)可能对肿瘤预后有重要意义,并可作为预测免疫治疗的生物标志物。然而,专注于B细胞的研究比专注于T细胞的研究要少得多,这使得它们在癌症免疫治疗中的复杂机制不清楚。随着scRNA-seq技术的发展,TIL-Bs的位置和功能可以被精确地确定,这可能有助于更好地理解其机制。从单细胞的角度来看,在本文中,我们讨论TIL-Bs亚种群分化轨迹,与其他细胞的相互作用,并总结B细胞的机制调节时间和影响免疫治疗效果,旨在为肿瘤研究提供一种新的方式针对B细胞。
单细胞测序可以进一步探索肿瘤内的异质性。与流式细胞术、质谱法或其他任何以前的方法不同,单细胞测序是一种连续的方法,而不是离散的方法。scRNA-seq的步骤主要包括以下四个步骤:(1)单细胞分离,(2)反转录成cDNA,(3)PCR扩增cDNA,(4)测序库构建(图1a)。荧光激活细胞分选(FACS)可用于从组织中分离特定的细胞(图1a)。在B细胞研究方面,采用流式细胞术筛选CD45+细胞,增加B细胞的比例;也可根据B细胞标记物直接选择靶向B细胞。作为scRNA-seq技术的突破,微流控系统将单个细胞封装在独立的微液滴中,该微液滴包含一个独特的分子标识符(UMI),用于对单细胞内的微转录材料进行条形码。根据每个细胞的UMI,即使细胞被裂解,在后续的分析中也可以找到转录信息。基于这一特点,10×GenomicsChromium平台同时测序数千个细胞。与Smart-seq2等低通量方法相比,10×GenomicsChromium平台因其成本低、效率高而被更广泛地应用于B细胞检测。
在对多种scRNA-seq方法的比较研究中,10×Genomics也比其他高通量方法如Drop-seq和Indrops[33]具有更高的灵敏度,更高的与线粒体基因匹配的reads比例,更低的噪声。利用10×Genomics和Smart-seq2平台,可以通过不同的免疫球蛋白重链特征区分CRC中B细胞的亚群,聚类结果无明显差异。但是,10×Genomics也有不足之处,它不能覆盖所有的基因,并且存在3区域偏倚,在检测基因突变或mRNA剪接位点时可能会遗漏一些重要信息。此外,这种方法对细胞质量有更高的要求,不同的组织和不同的获取样本的方法都不同。利用scRNA-seq,我们可以更精确地定义细胞的亚型,追踪它们的发育谱系,确定克隆型和表
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